如今，大部分細(xì)胞在塑料培養(yǎng)皿的表面生長，也就是說，是二維的。但在體內(nèi)，細(xì)胞則被其他細(xì)胞、組織和細(xì)胞外基質(zhì)重重包圍。 

    于是，研究人員開始嘗試3D細(xì)胞培養(yǎng)，并觀察它與2D培養(yǎng)的差異，包括基因表達(dá)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞間相互作用以及藥物反應(yīng)的改變。

    幸運(yùn)的是，從2D到3D細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換并非想象中那么困難，而且也是相當(dāng)值得的。“你的收獲在于所研究的細(xì)胞更接近它們的真實(shí)環(huán)境，這對你的生物學(xué)研究有好處，”TAP Biosystems的RAFT開發(fā)主管Grant Cameron如是說。

    下面我們就來介紹一些從2D向3D轉(zhuǎn)換時的注意事項(xiàng)。

3D系統(tǒng)的類型

    3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)（或支架）為細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境增添了第三維。它們有幾種主要的類型，包括來自天然材料的水凝膠支架，如細(xì)胞外基質(zhì)膠原蛋白。TAP Biosystems的RAFT（Real Architecture for 3D Tissue）技術(shù)正是基于膠原蛋白，它讓研究人員能夠開展細(xì)胞生物學(xué)、藥物開發(fā)和組織工程等研究。

    Life Technologies的Geltrex®和BD Biosciences的BD Matrigel™是從小鼠腫瘤中提取出的基底膜基質(zhì)，Sigma-Aldrich的MaxGel™是人細(xì)胞外基質(zhì)，而Life Technologies的AlgiMatrix來源于褐色海藻。Microtissues公司在其3D 培養(yǎng)皿上使用基于瓊脂糖的水凝膠。據(jù)介紹，在這種培養(yǎng)皿上，細(xì)胞會聚集并自我組裝成數(shù)百個大小均一的多細(xì)胞球體。

    中所使用的第二種類型的支架是合成的水凝膠，有時也包括仿生肽，它們可增強(qiáng)整合素的結(jié)合。BD Biosciences的BD™ PuraMatrix™肽段水凝膠和Sigma-Aldrich的HydroMatrix™就屬于這一類型，而Cellendes的3D Life Biomimetic 水凝膠也是由聚合物和交聯(lián)劑制成的。

    其他類型的人造支架是來自組織培養(yǎng)的塑料，甚至是可生物降解的塑料。還有一個系統(tǒng)，是利用磁懸浮讓細(xì)胞懸浮，其中細(xì)胞產(chǎn)生自己的細(xì)胞外環(huán)境，而無需塑料支架。

    n3D Biosciences公司的Bio-Assembler™系統(tǒng)就是這種，利用磁懸浮來3D培養(yǎng)細(xì)胞。該公司的科學(xué)家Glauco Souza介紹：“我們利用磁性納米顆粒來實(shí)現(xiàn)，而無需支架。你可以利用磁性筆來移動細(xì)胞，創(chuàng)建組織層，然后拿走磁鐵，細(xì)胞就自由了。”Souza領(lǐng)導(dǎo)的研究小組利用這種方法生成了一種四層的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，類似于肺組織。

    此外，還有一些系統(tǒng)可誘導(dǎo)球體形成，如B-Bridge的Lipidure-Coat板、3D Biomatrix的Perfecta3D®懸滴板，以及STEMCELL的AggreWell™，適合人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞。

何時轉(zhuǎn)換

    越來越多的證據(jù)表明，在3D培養(yǎng)系統(tǒng)中生長的細(xì)胞會表現(xiàn)出更生理的表型、相互作用及反應(yīng)。因此，當(dāng)結(jié)果的生理相關(guān)性很重要，或者你無法通過其他方式來準(zhǔn)確重現(xiàn)細(xì)胞行為時，或許應(yīng)該考慮向3D轉(zhuǎn)換。

    AMSBIO的業(yè)務(wù)部Peter Rettenberger認(rèn)為：“細(xì)胞在平坦的塑料表面上生長，這與它們天然的生理環(huán)境相距甚遠(yuǎn)，也需要一定程度的適應(yīng)。與之相關(guān)的是對細(xì)胞的某種選擇壓力。”

    當(dāng)然，對于了解報告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)而言，3D培養(yǎng)可能并不重要。但如果你研究的是復(fù)雜的藥物相互作用，情況就大不相同了。在3D培養(yǎng)中，細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性可能與活體腫瘤更為相似。3D微組織中的藥物運(yùn)輸和擴(kuò)散更像3D的器官和組織。

    現(xiàn)在你準(zhǔn)備好了？以下這些秘訣可幫助你平穩(wěn)過渡。首先，注意接種密度，需要比2D培養(yǎng)更高。Cameron解釋道：“許多細(xì)胞要彼此靠近，甚至要與其他細(xì)胞類型共同培養(yǎng)。每孔中的細(xì)胞數(shù)量應(yīng)增加，10-20倍是個合理的考慮因素。”他還建議在開展實(shí)驗(yàn)之前讓細(xì)胞有一些過渡時間。

    選擇的3D支架材料也是成功過渡的一個關(guān)鍵因素。Cardy建議考慮幾個關(guān)鍵問題：“我是否需要模擬細(xì)胞的天然細(xì)胞外基質(zhì)？是否需要細(xì)胞形成有功能的多細(xì)胞結(jié)構(gòu)？是否需要通過顯微鏡來分析我的3D培養(yǎng)，和/或回收細(xì)胞用于進(jìn)一步分析？我是否想要控制凝膠的剛度和生物活性成分？”這些問題的答案可以幫助你縮小選擇范圍。

小心陷阱

    支架的選擇也為3D培養(yǎng)的過渡帶來陷阱，因?yàn)樗屢恍┓治龇椒◤?fù)雜化。顯微鏡觀察就變得很有挑戰(zhàn)性。2D培養(yǎng)的單層細(xì)胞很容易成像，而3D培養(yǎng)物的多層細(xì)胞會散射光線。共聚焦顯微鏡則很好地解決了這個問題，但其他類型的分析也許還很難。Cardy認(rèn)為，許多支架都不適合免疫組化技術(shù)或細(xì)胞復(fù)蘇。

    此外，細(xì)胞的行為也可能與2D有很大區(qū)別，例如，形成更的結(jié)構(gòu)，如癌癥腫瘤樣。正如Cameron所言：“開辟了一系列新的細(xì)胞反應(yīng)和可能，但這些也會讓研究人員大吃一驚。”

上海起福生物科技有限公司
：楊建輝
：
辦公：
*8006

:
:http://thaiccg.com/
地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室