Protein A Sepharose 4FF 產品使用說明書

發布時間：2013/9/9 點擊次數：3933

Protein A Sepharose 4FF 產品使用說明書

——高IgG結合特異性高流速低蛋白A脫落

產品特點

Protein A Sepharose 4FF ，上海起福生物專業代理，：

產品介紹

Protein A sepharose介質是經過我們公司長期開發，在公司生產的native protein A 的基礎上精致而成。通過Protein A Sepharose 4FF，可分離和純化多種哺乳動物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。本產品相對同類產品具有如下優勢：

1、偶聯條件溫和，更好的保持了protein A的構象，所以抗體載量高，同體積的介質，相同規模的純化設備，相同體積介質，抗體的產量明顯高于用同類產品，大大的降低了抗體藥物生產成本。

2、非常穩定，不易脫落，用其生產的抗體中protein A的殘留比同類產品的更少。

3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生產都是在清潔車間生產，符合制藥企業生產需求。

4、公司生產的Protein A sepharose使用壽命長，常規條件下能夠重復使用100次以上。

使用說明

（1）緩沖液的準備：

平衡緩沖液：純化不同動物和不同亞型抗體時所用平衡緩沖液是不同的，部分參照如下：抗體種類	平衡緩沖液成分
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b	10mM 磷酸鹽緩沖液，150mM NaCl，pH 7.21
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3	50mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5

（2）樣品的準備

樣品上柱前先用平衡緩沖液稀釋5至10倍，從而確保樣品液的成分和pH與平衡緩沖液相近。如果上樣體積過大，可以采取調節上樣液pH和鹽濃度的方式，使樣品的pH和電導與平衡液接近，使樣品中的緩沖體系與平衡緩沖液相同。

細胞培養液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。

樣品在上柱前也需0.45μm微孔濾膜過濾。

（3）操作步驟

a）填料裝柱后，用純水流洗至少3個柱管體積，以沖掉乙醇，再用平衡緩沖液流洗至少5個柱管體積來平衡柱子。

b）將樣品上柱，上樣流速控制在60cm/h。

c）平衡緩沖液再洗5-10個柱床體積，把UV洗至基線。

d）洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰，立即用中和緩沖液中和到中性。

e）再生緩沖液流洗3-5個柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個柱床體積。柱子置于+4-8℃保存。

操作中如果沒有在線的蛋白監測系統，洗脫峰時可以分階段

收集，zui后根據測定結果合并活性部分。