OncoImmunin專有技術(shù)
OncoImmunin,Inc.設(shè)計(jì),合成,驗(yàn)證并申請(qǐng)了專有的新型分子,可以用作熒光蛋白酶底物,用于測(cè)定活細(xì)胞以及血清中寡核苷酸(例如siRNA)的體內(nèi)遞送酶活性,無(wú)毒性以及在溶液中表現(xiàn)出優(yōu)異性能后復(fù)活或小分子藥物在體內(nèi)試驗(yàn)中均未通過(guò) 與其他熒光底物相比,OncoImmunin蛋白酶底物的優(yōu)勢(shì)是4倍:
OncoImmunin的熒光蛋白酶底物設(shè)計(jì)允許使用熒光顯微鏡確定細(xì)胞內(nèi)酶活性。緩沖液和人血清中活性的測(cè)定可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)完成,或者對(duì)于大樣品通量,可以使用專有的高通量篩選(HTS)系統(tǒng)(請(qǐng)參閱頁(yè)面) 注-吸收率測(cè)量也是可能的。 要了解有關(guān)OncoImmunin,Inc.及其酶活性測(cè)定試劑盒的更多信息,請(qǐng)從下面的類別中進(jìn)行選擇:
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熒光蛋白酶底物的基本原理
菜單
熒光團(tuán)的選擇 進(jìn)行熒光團(tuán)的選擇,使得激發(fā)和發(fā)射都在可見波長(zhǎng)范圍內(nèi)。選擇這種特定染料的理由是,生物材料包含在紫外線波長(zhǎng)域中既吸收又發(fā)出熒光的分子。這種自發(fā)熒光會(huì)阻礙樣品中少量活性的測(cè)定,并降低活性測(cè)定的可靠性。 基板設(shè)計(jì)和計(jì)算機(jī)建模結(jié)構(gòu) 肽底物與共價(jià)偶聯(lián)的熒光團(tuán)合成。后者在策略上遠(yuǎn)離靶序列,以確保不干擾蛋白水解切割。 彈性蛋白酶底物的代表性計(jì)算機(jī)模型結(jié)構(gòu)如下所示,其中黃帶代表肽主鏈構(gòu)象,青色代表附著的熒光團(tuán)。綠色箭頭表示切割位點(diǎn)。 顯示了該肽的兩個(gè)不同視圖。 注意:首先,肽主鏈具有類似于 卵裂誘導(dǎo)的熒光和吸收變化 在完整的肽中,青色熒光團(tuán)形成基態(tài)二聚體。該基態(tài)二聚體的吸收光譜可以用激子理論來(lái)適合地描述。肽裂解消除了這種染料與染料的相互作用,并導(dǎo)致熒光增加和吸收變化顯著。 |
彈性蛋白酶測(cè)定
該彈性蛋白酶測(cè)定法可在多種條件下工作。在溶液或細(xì)胞懸液中進(jìn)行測(cè)定。即使在顯微鏡下! 例如,一種應(yīng)用是使用熒光酶標(biāo)儀篩選抗炎藥候選物。用豬胰彈性蛋白酶測(cè)定的該底物的Km在800 nM范圍內(nèi),而其他基于pNA和AMC生色團(tuán)的生色底物的Km值分別為6.2和0.8 mM [請(qǐng)參見MJ Castillo,K. Nakajima,M [Zimmerman and JC Powers Anal Biochem 99:53-64(1979)]。 當(dāng)您認(rèn)為現(xiàn)在可以在您認(rèn)為不可能的條件下測(cè)量彈性蛋白酶活性時(shí),這確實(shí)是技術(shù)驅(qū)動(dòng)型科學(xué)的一個(gè)例子。 沒(méi)有其他彈性蛋白酶檢測(cè)法是喜歡的! 敏感 - 與公里在NM-800,這是熒光,所有后 從下面的應(yīng)用筆記中選擇:溶液測(cè)量 您也可以將這些熒光底物用于:
帶有支持?jǐn)?shù)據(jù)的應(yīng)用筆記即將發(fā)布 |
凋亡測(cè)定和試劑
與OncoImmunin的CaspaLux ® 基材,胱天蛋白酶的-1,6,8和活動(dòng)-9可以被測(cè)量。此外,通過(guò)以互補(bǔ)色組合5種不同的底物,可同時(shí)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和顯微鏡在活細(xì)胞中確定多種caspase活性。高通量分析也是可用的。
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